尿液干化学检测(手工法验证）
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【尿蛋白定性】
加热乙酸法
原理：
加热可使蛋白质变性凝固，加酸可使蛋白质接近等电点，促使蛋白沉淀。此外，加酸还可溶解碱性盐类沉淀物。
试剂：
1. 5%乙酸溶液
2. 饱和氯化钠溶液
操作：
1. 将约10ML新鲜尿液移入一耐热的12mm*100mm试管中；
2. 将试管斜置在火焰上，煮沸上部尿液；
3. 滴加5%乙酸3~4滴，再煮沸后，立即观察结果。如有浑浊或沉淀，提示尿内含有蛋白质。
结果判读：
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结果 |
现象 |
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阴性（－） |
不显浑浊 |
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可疑（±） |
在黑色背景下呈轻微浑浊 |
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1+ |
呈明显白雾状（含蛋白约0.1-0.5g/L） |
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2+ |
呈浑浊，有明显颗粒（含蛋白约0.5-2.0g/L） |
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3+ |
大量絮片状沉淀，浑浊（含蛋白约2.0-5.0g/L） |
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4+ |
出现凝块并有大量絮片状沉淀（含蛋白约＞5.0g/L） |
【尿血红蛋白定性】
原理：
血红蛋白具有过氧化物酶样作用，以催化H2O2作为电子受体使色原氧化呈色，其颜色的深浅与血红蛋白含量成正比。又称尿隐血试验。
试剂：
1.10g/L邻联甲苯胺溶液 取邻联甲苯胺1g，溶于冰乙酸和无水乙醇各50ml的混合液中，置棕色瓶中，放冰箱内保存，可用8~12周，若颜色变深褐色，应重新配置。
2.过氧化氢溶液 冰乙酸1份，加3%过氧化氢溶液2份
操作：
于12mm*100mm试管中置尿液4滴,加10g/L邻联甲苯胺溶液2~3滴,混匀。再加过氧化氢溶液1~2滴，混匀。如呈现蓝色，为阳性反应。【尿葡萄糖定性】
原理：
含有醛基的葡萄糖，在高热及碱性溶液中，能将溶液中蓝色的硫酸铜（二价）还原为氧化亚铜（一价），出现黄色至砖红色沉淀物。
试剂：
改良班氏定性试剂：分别溶解硫酸铜（CuSO4.5H2O）10g、枸橼酸钠42.5g和无水碳酸钠25g于适量蒸馏水中，可加温助溶。把碳酸钠溶液加入到枸橼酸钠溶液中，混合后再加硫酸铜溶液，以蒸馏水加至1000mL。
注：每次配好后应做预试验，即取试剂1ml煮沸1min应不变色；加入5g/L葡萄糖2滴，呈阳性反应。
操作：
取改良班氏定性试剂1ml于试管中，加热煮沸，若不变色，则可加入尿液（0.1ml）。再煮沸1~2min，冷却后观察结果。
结果判读：
结果 现象
阴性（－） 试剂不变色，如有较高的磷酸盐可呈蓝色沉淀
可疑（±） 冷却后呈绿色，但无沉淀（含糖量＜6mmol/L）
1+ 呈黄绿色浑浊，管底有少量黄色沉淀（含糖量6~28 mmol/L）
2+ 煮沸1min呈黄绿色反应，有较多黄色沉淀（含糖量28~55 mmol/L）
3+ 煮沸15s呈土黄色沉淀（含糖量55~110 mmol/L）
4+ 煮沸时即呈大量砖红色浑浊并迅速沉淀，上清液无色（含糖量＞110 mmol/L）
【尿胆红素定性】
Harrison法
原理：
用硫酸钡吸附尿中胆红素后，滴加酸性三氯化铁试剂，使胆红素氧化成胆绿素而呈绿色反应。
试剂：
1. 酸性三氯化铁试剂 称取三氯乙酸25g，加蒸馏水少许溶解，再加入三氯化铁0.9g，溶解后加蒸馏水至100ml。
2. 100g/L氯化钡溶液。
3. 氯化钡试纸：将优质滤纸裁成10mm*80mm大小纸条，浸入饱和氯化钡溶液内（氯化钡30g，加蒸馏水100ml）数分钟后，放置室温或37℃温箱内待干，储存于有塞瓶中备用。
操作：
1. 试管法 取尿液5ml，加入100 g/L氯化钡溶液约2.5ml，混匀，此时出现白色的硫酸钡沉淀。离心后弃去上清液，向沉淀物加入酸性三氯化铁试剂数滴。若呈现绿色或蓝绿色者为阳性结果。
2. 氯化钡试纸法 将氯化钡试纸条的一端浸入尿中，浸入部分至少50mm，5~10s后，取出试条，平铺于吸水纸上。
在浸没尿液的部分上滴加酸性三氯化铁试剂2~3滴，呈绿、蓝色为阳性，色泽深浅与淡红色含量呈正比。【尿胆原定性】
改良Ehrlich法
原理：
尿胆原在酸性溶液中与对二甲氨基苯甲醛反应，生成红色化合物。
试剂：
1. 对二甲氨基苯甲醛试剂 称取对二甲氨基苯甲醛2g，溶于80ml蒸馏水中，缓慢地加入浓盐酸20ml，混合，储存于棕色瓶中保存。
2. 100 g/L氯化钡溶液。
操作：
1. 尿液内如含胆红素，应除去胆红素（取100 g/L氯化钙1份与尿液4份混合，离心沉淀，取上清液备用）
2. 取新鲜无胆红素尿液2ml，加入尿胆原试剂0.2ml，静置10min，观察结果。
结果判读：
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结果 |
现象 |
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阴性（－） |
在白色背景下从管口直视管底，不呈红色 |
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1+ |
呈微红色 |
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2+ |
呈樱红色 |
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3+ |
立即呈深红色 |
附：影响尿试带结果的因素
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项目 |
假阴性 |
假阳性 |
说明 |
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葡萄糖 |
维生素C浓度增高） |
留尿容器中有氧化剂 |
出现酮体时试验灵敏度降低；比重增高时试验灵敏度降低；新试剂使维生素C的假阴性减少 |
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胆红素 |
维生素C浓度增高） |
非那匹啶；依托度酸 |
出现维生素C时试验灵敏度降低；亚硝酸盐增多时试验灵敏度降低；硫酸吲哚酚对阴性和阳性结果都有干扰 |
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酮体 |
/ |
色素尿（痕量）；尿中大量左旋多巴代谢物；2-硫基乙醇磺酸 |
不与β-羟丁酸和丙酮反应；与苯丙酮酸或钛类化合物呈红色或橘红色反应，和酮体呈色不同 |
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比重 |
/ |
明显糖尿；放射线造影剂 |
注意有些新指示剂已不受非离子颗粒和造影剂影响；碱性尿读数可降低；明显蛋白尿（＞1g/L）时结果增高 |
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隐血 |
甲醛保存尿 |
留尿容器中有氧化剂；尿路感染时微生物产生过氧化物酶 |
/ |
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PH |
/ |
/ |
尿试带蛋白区溢出时PH降低 |
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蛋白质 |
不能检出本-周氏蛋白、球蛋白 |
高碱性尿；尿液为季胺类化合物污染（皮肤清洁剂、氯已定）；非那匹啶；输注聚乙烯吡咯烷酮（血液代用品）；肉眼血尿 |
/ |
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尿胆原 |
甲醛 |
对氨基水杨酸，磺胺药，对氨基苯磺酸；非那匹啶（用非Ehrlich试剂） |
尿胆原缺乏不能用本试验检出 |
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亚硝酸盐 |
感染细菌无亚硝酸盐还原酶；膀胱通过时间短，限制硝酸盐还原为亚硝酸盐；维生素C浓度≥250mg/L |
药物使尿呈红色，或在酸性介质中尿呈红色 |
/ |
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白细胞 |
四环素浓度高 |
/ |
葡萄糖（＞30g/L）、比重和草酸浓度增高时灵敏度降低；受呋喃妥因、庆大霉素、头孢氨苄和高浓度白蛋白（＞5g/L）的干扰 |